標準曲線本質與制作
發(fā)布時間:2021-10-14 09:00:45來源:生物之家
分析檢測的首要任務是定性和定量,定性可以說是有和無的問題,定量是提供待測物質含量范圍的一個過程,這當中包含了任何定性定量都有不確定度的含義。而普遍采用的標準曲線已然是分析檢測中的常規(guī)工作,本篇內容以講解加問答的形式探討標準曲線使用過程中的難點和誤區(qū),結合數(shù)據(jù)處理版面關于標準曲線的問題交流,以期答疑解惑、共同精進。
本文內容共分為兩個部分:標準曲線的本質、標準曲線的做法
一、標準曲線的本質
分析檢測中的標準曲線是指一系列已知含量(濃度/量)的物質與儀器響應/信號之間的關系,數(shù)學處理就是曲線方程,圖形表示就是標準曲線。
標準曲線的目的是可以根據(jù)標準曲線查出待測物質的含量。當我們得到一系列已知含量的物質的響應后,就會去建立函數(shù)關系,數(shù)學上稱曲線擬合,由于直線最為簡單,所以常常用直線方程加以擬合,當然會用到多項式擬合等其他方式。
標準曲線的核心問題要解決:
1、能找到確切濃度的標準物質或標準品。
最好的標準系列應該是樣品基體匹配的標準系列
2、標準系列和待測物質一定要有相同和一致的基體,因為樣品基體可能會干擾儀器的響應,從這個意義上講,樣品的前處理實際就是提供標準和樣品同樣的基體環(huán)境,盡量祛除干擾基體。所以。
而方法建立過程中首先要考慮的當然是基體干擾的問題,推薦用標準加入曲線和Youden曲線分別考察樣品基體所帶來的乘積性干擾和加和性干擾。
標準加入曲線就是在樣品中加入一系列標準,然后考察該標準加入曲線和標準曲線斜率的統(tǒng)計學差異,若有差異需考慮用標準加入法定量;而Youden曲線就是對樣品做一系列稀釋,然后用稀釋倍數(shù)如1/10,1/5,1/2,1對儀器響應做曲線,考察該Youden曲線的截距與0的差別,若有差別則提示有加和性干擾,此時測定值要減去該截距才是真實值。只有解決了標準曲線與樣品基體的匹配問題,我們的定量才可靠。內標法和替代物的使用則是為了解決儀器和前處理的影響問題。
二、
按GB/T 22554-2010《基于標準樣品的線性校準》推薦:
1、標準曲線的濃度范圍應覆蓋正常操作條件下的被測量范圍;
2、標準樣品的組分盡量與被測樣品組分一致;
3、標準樣品的濃度值應等距離的分布在被測量范圍;
4、標準樣品的個數(shù)至少應有3個濃度;
5、每個標準點,這個重復是指從稀釋開始至少重復2次。
如果國家標準有相應的濃度系列推薦,盡量按國家標準,如果你要偷懶,比如我要減少標準點,至少要有理論標準支撐,比如至少要3個濃度。工作中我們經常采用線性校準,因為線性方程最為簡潔。