抗體保存三大知識點

只要抗體保存好，實驗失敗就會少

作為嬌氣的蛋白質(zhì)，抗體的保存有很多需要注意的地方。小艾為大家總結(jié)了抗體保存的溫度、濃度和抗菌操作，希望對大家有幫助哦。

一向自詡玉面小生的小艾這兩天臉也是黑的不行。沒想到大風(fēng)大浪都過來的人了，陰溝里翻了船。做了這么多年的實驗，小艾竟然在一個WB實驗上卡了一周。

更可氣的是，最后發(fā)現(xiàn)原因竟然是抗體失效了。原來是之前的實習(xí)生錯將應(yīng)該存放于-20℃的抗體放在了4℃冰箱里，并保存了數(shù)月，于是，抗體很不幸的失效了。

看來，是時候強(qiáng)調(diào)一下抗體保存的重要性了。

抗體作為蛋白質(zhì)試劑，保存條件是非常重要的。只要條件得當(dāng)，抗體一般都可以保存幾個月到幾年。

保存溫度

對于我們的大部分抗體而言，分裝為小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是最佳的長期保存條件。此外，在收到抗體后，也可暫時保存至4℃冰箱中，短期保存時間為1-2周。也有一小部分抗體適合長期保存于4℃冰箱。

分裝前應(yīng)先離心沉降掛在管壁和管蓋上的抗體，分裝量取決于您的實驗常用量，但建議不能少于10μl，以避免蒸發(fā)等帶來的干擾。分裝后的抗體試劑應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，可短時間（1-2周）保存于4℃冰箱中。

反復(fù)凍融可能使抗體變性，導(dǎo)致抗體形成聚集體，從而降低其結(jié)合能力。對大部分抗體而言，在-20 ℃下保存就已足夠；在-80 ℃下保存并無明顯優(yōu)勢。保存抗體要避免使用無霜冰箱，因為凍融循環(huán)（用于減少霜的形成）會造成抗體反復(fù)凍融而失活。

部分抗體試劑中會加入終濃度40%-50%的甘油使其在-20℃下保持溶液狀態(tài)，從而降低凍融損傷。此類抗體產(chǎn)品請勿儲存于-80℃冰箱中，否則仍會凝固。值得注意的是，抗體在加入甘油后容易被細(xì)菌污染，操作時應(yīng)小心，確保無菌。

以下是一些需要注意的常見特例：

• 部分酶偶聯(lián)抗體，需要保存在 4 ℃，這些抗體經(jīng)歷凍融不僅會影響抗體的結(jié)合能力，還會降低酶活性。
• 偶聯(lián)抗體（無論是偶聯(lián)有熒光染料、酶還是生物素）應(yīng)盡量保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶。暴露于光下會影響偶聯(lián)物的活性。熒光偶聯(lián)物尤其容易發(fā)生光致漂白，因此在實驗各階段都應(yīng)避光。
• IgG3 同型抗體的獨特之處在于其解凍后容易形成聚集體，因此應(yīng)始終保存在 4 ℃。
• 腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后應(yīng)盡快凍存。

防止降解

抗體試劑稀釋至工作濃度后，建議及時使用，不建議對稀釋后的抗體進(jìn)行長時間保存。如果必須保存，建議保存于4℃并于一周以內(nèi)使用。一般而言，蛋白質(zhì)濃度高于1mg/ml時更不容易降解，因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白（BSA）作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來防止降解。加入的蛋白質(zhì)還能盡可能減少抗體結(jié)合到容器壁上造成的損失。

需要注意的是，請勿向?qū)⒁M(jìn)行偶聯(lián)的抗體中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，因為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑會與抗體競爭，降低偶聯(lián)效率。

防止污染

為了防止微生物污染，可將疊氮化鈉作為抗菌劑加入抗體工作液中，保持最終濃度為 0.02% (w/v)。Abcam的多款抗體中都含有疊氮化鈉，濃度范圍為 0.02%-0.05%?？贵w數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分對此有說明。

此外，如果要對活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理，或進(jìn)行體內(nèi)研究時，請務(wù)必使用不含疊氮化鈉的試劑。抗菌劑會阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)，對大部分生物體都有毒害作用。

高濃度的疊氮化鈉會干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng)，因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除。或可選用0.01%硫柳汞鈉（硫柳汞），這種抗菌劑不含伯胺。

抗體溶液中的疊氮化鈉可通過透析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da（IgM 約為 600,000 Da），疊氮化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微透析裝置可去除疊氮化鈉。

透析過程在燒杯中（置于磁力攪拌器上，溫度保持 4 ℃）進(jìn)行，每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS，攪拌透析裝置 6 小時。更換 PBS 兩次，每次更換后均攪拌至少 6 小時。如有可能，所有材料都應(yīng)滅菌，并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物。

說了這么多，你記住了嗎？可別在抗體保存上摔跟頭啦！