1、檢測范圍：適用于谷物加工品及谷物碾磨加工品中嘔吐毒素的快速測定

　　2、檢測原理：樣品中嘔吐毒素與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和與檢測卡中檢測線(T線)上嘔吐毒素-BSA偶聯(lián)物的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線(C線)顏色深淺比較，對樣品中嘔吐毒素進行定性判定。

　　3、試劑和材料

　　除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。

　　3.1試劑

　　3.1.1提取液：水或膠體金免疫層析檢測卡專用提取液。

　　3.1.2甲醇。

　　3.2參考物質(zhì)

　　嘔吐毒素參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1，純度≥99%。

　　表1嘔吐毒素參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量

　　注：或等同可溯源物質(zhì)。

　　3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

　　準(zhǔn)確稱取適量嘔吐毒素參考物質(zhì)(精確至0.0001g)，用甲醇溶解，配成0.10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20℃保存，有效期3個月。

　　3.4材料

　　3.4.1嘔吐毒素膠體金免疫層析檢測卡。

　　3.4.2中速定性濾紙。

　　3.4.3濾膜：0.45µm水相濾膜。

　　4儀器及設(shè)備

　　4.1天平：感量分別為0.01g和0.0001g。

　　4.2粉碎機。

　　4.3樣品篩：0.9mm。

　　4.4漩渦混合器：1500rpm/min。

　　4.5移液器：100μL，200μL，1.0mL。

　　4.6恒溫裝置：37.0℃±2.0℃。

　　4.7環(huán)境條件：溫度15-30℃，濕度≤80%。

　　5分析步驟

　　5.1試樣制備

　　樣品粉碎：將待測樣品粉碎，過0.9mm樣品篩，充分混合均勻，備用。

　　5.2試樣提取

　　準(zhǔn)確稱取粉碎混勻樣品5.0g于離心管中，加入25.0mL水或?qū)Ｓ锰崛∫?3.1.1)，漩渦混合器(4.4)提取5min，靜置1min，中速定性濾紙(3.4.2)過濾，濾液用0.45µm水相濾膜(3.4.3)過濾，將濾液稀釋至檢測卡(3.4.1)檢測范圍內(nèi)，混勻，即得待測液。

　　5.3測定步驟

　　吸取150µL上述待測液加入到檢測卡中，恒溫裝置內(nèi)反應(yīng)6min后進行結(jié)果判定。

　　5.4質(zhì)控實驗

　　每批樣品應(yīng)同時進行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗。

　　5.4.1空白試驗

　　稱取空白試樣，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

　　5.4.2加標(biāo)質(zhì)控試驗

　　準(zhǔn)確稱取空白試樣5.0g或適量(精確至0.01g)置于離心管中，加入適量嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，使嘔吐毒素濃度為1.0mg/kg，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

　　6結(jié)果判定要求

　　根據(jù)控制線(C線)和檢測線(T線)顏色變化進行結(jié)果判定，采用目測法對結(jié)果進行判定，比色法和消線法判定原則如下：

　　6.1比色法

　　6.1.1無效

　　控制線(C線)不顯色，無論檢測卡(T線)是否顯色，表示操作不正確或檢測卡已失效。

　　6.1.2陽性結(jié)果

　　控制線(C線)顯色，檢測線(T線)顯色明顯淺于控制線(C線)，判為陽性。

　　6.1.3陰性結(jié)果

　　控制線(C線)顯色，檢測線(T線)比控制線(C線)顯色深或檢測線(T線)與控制線(C線)顯色基本一致，判為陰性。

　　圖1 比色法結(jié)果判定示意圖

　　6.2消線法

　　6.2.1無效

　　控制線(C線)不顯色，無論檢測卡(T線)是否顯色，表示操作不正確或檢測卡已失效。

　　6.2.2陽性結(jié)果

　　控制線(C線)顯色，檢測線(T線)不顯色，判為陽性。

　　6.2.3陰性結(jié)果

　　控制線(C線)顯色，檢測線(T線)顯色，判為陰性。

　　圖2 消線法結(jié)果判定示意圖

　　6.3質(zhì)控樣品要求

　　空白試驗測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗測定結(jié)果應(yīng)為陽性。

　　7結(jié)論

　　當(dāng)檢測結(jié)果為陽性時，應(yīng)對結(jié)果進行確證。

　　8性能指標(biāo)

　　8.1檢測限：嘔吐毒素為1.0mg/kg。

　　8.2判定限：嘔吐毒素為0.9mg/kg。

　　8.3假陰性率：≤5%。

　　8.4假陽性率：≤10%。

　　注：假陽性率和假陰性率計算方法參照《食品快速檢測方法評價技術(shù)規(guī)范》(食藥監(jiān)辦科〔2017〕43號)執(zhí)行。

　　9其他

　　本方法測定步驟和結(jié)果判讀也可以根據(jù)廠家檢測卡的說明書進行，但應(yīng)符合或優(yōu)于本方法規(guī)定的性能指標(biāo)。

　　本方法參比方法為GB 5009.111-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌锏臏y定》。

　　本方法負責(zé)起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所。

　　驗證單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，南京工業(yè)大學(xué)食品與輕工學(xué)院，湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院。

　　主要起草人：李培武、王督、陳愛亮、施祖灝、范志勇。