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多克隆抗體制備流程

發(fā)布時(shí)間:2020-08-17 00:11:48來源:抗體知識(shí)專題

1.抗原制備

一般的科研實(shí)驗(yàn)中,我們經(jīng)常使用的抗原有天然蛋白、重組蛋白、偶聯(lián)的多肽、偶聯(lián)的小分子化合物等。

2.抗原乳化

將抗原與弗氏佐劑按1:1混合后進(jìn)行乳化,其中一免采用弗氏完全佐劑,以后均采用弗氏不完全佐劑。乳化時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右,當(dāng)其乳化半小時(shí)后,取出攪拌器頭,在一裝有水的容器口輕輕敲一下,讓攪拌鐵絲上粘有的乳化后的免疫原掉一滴到水里,其遇水不擴(kuò)散時(shí)即已乳化好。如還有擴(kuò)散現(xiàn)象,繼續(xù)乳化。

3.免疫動(dòng)物

免疫所用的動(dòng)物盡量選擇適齡的雄性動(dòng)物(多克隆抗體制備動(dòng)物通常選雄性兔)。將乳化好的抗原轉(zhuǎn)入2.5mL的注射器中,排除注射器中的氣泡,在兔背部進(jìn)行多點(diǎn)皮下注射。每次注射量在300-500ug。

4.抗血清鑒定

四免后三到五天少量取血進(jìn)行效價(jià)檢測,確認(rèn)免疫是否成功。

5.抗血清制備

經(jīng)抗血清鑒定免疫成功以后,殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,收集全部血清。

6.抗血清純化

選擇合適的方法純化抗血清,得到抗體。

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