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呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條研制

發(fā)布時(shí)間:2021-08-04 10:11:05來(lái)源:知網(wǎng)

  硝基呋喃類(lèi)藥物是一類(lèi)人工合成的抗生素,因價(jià)格低廉,被廣泛用于水產(chǎn)品的病害防治。硝基呋喃類(lèi)藥物半衰期很短,在動(dòng)物體內(nèi)代謝迅速,且其代謝物可在機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定存在。硝基呋喃類(lèi)藥物的殘留嚴(yán)重威脅到人體的健康,因此,世界各國(guó)均把硝基呋喃類(lèi)藥物列為禁用漁藥。

  目前,用于檢測(cè)硝基呋喃類(lèi)代謝物的常用方法為L(zhǎng)C-MS/MS,但這種方法需要昂貴的儀器,且前處理復(fù)雜,成本高、分析時(shí)間又長(zhǎng),不利于現(xiàn)場(chǎng)分析。而免疫層析分析法具有省時(shí)、高效、成本低等優(yōu)點(diǎn),而且檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性好,非常適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大批量篩查。本研究旨在研制出呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條,初步建立呋喃唑酮代謝物殘留的免疫層析快速檢測(cè)方法,為商用化試紙條的開(kāi)發(fā)提供方法依據(jù)。 首先實(shí)驗(yàn)對(duì)制備膠體金的方法進(jìn)行了優(yōu)化,采用三種還原方法來(lái)制備膠體金,對(duì)比制備的膠體金性能參數(shù),選擇最優(yōu)的還原方法。實(shí)驗(yàn)選擇檸檬酸三鈉還原制備膠體金,制備的膠體金粒徑為18nm左右。 利用上述方法制備的膠體金來(lái)標(biāo)記AOZ單克隆抗體,制備金標(biāo)探針,再將AOZ人工合成抗原(CPAOZ-BSA)和羊抗鼠二抗(IgG)分別包被在硝酸纖維素膜的T線(xiàn)和C線(xiàn)處,組裝成膠體金免疫層析試紙條。單抗的最佳標(biāo)記量為7.8μg/mL,單抗標(biāo)記最佳的pH為9.0,抗原的最佳包被濃度為1.0mg/mL,二抗的最佳包被濃度為1.0mg/mL,金標(biāo)抗體的最佳稀釋倍數(shù)為2倍稀釋?zhuān)z體金免疫層析試紙條的目測(cè)檢測(cè)限為80ng/mL。 試驗(yàn)研究了幾種硝基呋喃類(lèi)代謝物(AOZ)的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物對(duì)試紙條的特異性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:試紙條對(duì)SEM、CPSEM、AHD、CPAHD等均不發(fā)生交叉反應(yīng)性。 試紙條檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單,穩(wěn)定性較高,適用于呋喃唑酮代謝物殘留的現(xiàn)場(chǎng)初步篩選,也為其他獸藥殘留試紙條的制備提供借鑒。

  我司長(zhǎng)期穩(wěn)定提供呋喃西林抗原抗體、呋喃唑酮抗原抗體,呋喃它酮抗原抗體,呋喃妥因抗原抗體,產(chǎn)品性能穩(wěn)定,適用于膠體金、WB、電化學(xué)、熒光等實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。


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