簡單易懂的膠體金免疫層板技術(shù)
發(fā)布時(shí)間：2022-05-19 09:53:21來源：體外診斷IVD知識庫
將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果（膠體金紅色）。有三種反應(yīng)模式：夾心法，間接法，競爭抑制法。
1、雙抗體夾心法（測抗原）膠體金試紙?jiān)?/strong>
以新型冠狀病毒為抗原，試紙上有兩種針對新型冠狀病毒的抗體存在，在試紙不同的位置上。而膠體金標(biāo)記的抗體是其中一種針對抗原的抗體，在試紙的結(jié)合墊上。
（1）當(dāng)咽拭子、鼻拭子、肺泡灌洗液的樣本滴上加樣孔之后，再滴加幾滴流動介質(zhì)，當(dāng)臨床樣本里面有特異性病毒抗原（Antigen）時(shí)，在結(jié)合墊處的金標(biāo)抗體（比如識別冠狀病毒單抗和膠體金偶聯(lián)）會識別并結(jié)合病毒抗原，形成“新型冠狀病毒-金標(biāo)抗體”復(fù)合物；
（2）樣品在層析作用下往前移動，當(dāng)?shù)竭_(dá)T線時(shí)（檢測線），T線處具有T線抗體（另一種針對新型冠狀病毒的抗體，比如多抗，和金標(biāo)單抗識別的抗原表位不同，可以識別同一抗原），則會形成“T線抗體—待測抗原—膠體金偶聯(lián)抗體”復(fù)合物，所以T線處膠體金大量聚集從而顯現(xiàn)紅色（陽性）
（3）過量的金標(biāo)抗體會繼續(xù)從T線處流向C線處（質(zhì)控線），C線處具有專門針對金標(biāo)抗體的抗體（抗-抗體），當(dāng)過量的膠體金顆粒到達(dá)C線后，C線抗體就會與金標(biāo)抗體結(jié)合形成“C線抗體-金標(biāo)抗體”復(fù)合物，大量積聚后顯紅色。C線抗體識別金標(biāo)抗體的能力極強(qiáng)，所以質(zhì)控線一定會顯紅色，如果這條線沒有顯色，那么這次檢測結(jié)果是無效的。
2、間接法（測抗體）膠體金試紙?jiān)?/strong>
還是以新型冠狀病毒為例，不過相較前面咽拭子、肺泡灌洗液的樣本，此處需要的是血液（血清）樣本。劃重點(diǎn)當(dāng)病原侵入機(jī)體最早產(chǎn)生的抗體是IgM（IgM大約一周后產(chǎn)生，知識點(diǎn)隨便翻一本免疫學(xué)的書）。所以機(jī)體會產(chǎn)生針對新型冠狀病毒的IgM（就叫IgM*）。
（1）血液（血清）樣本滴加后，結(jié)合墊處的金標(biāo)抗原（比對金標(biāo)新型冠狀病毒某體外重組蛋白），形成“IgM*-金標(biāo)抗原”復(fù)合物；
（2）在T線處具有抗IgM抗體，當(dāng)“IgM*-金標(biāo)抗原”到達(dá)后，形成“抗IgM抗體-IgM*-金標(biāo)抗原”復(fù)合物，大量聚集顯紅色；
（3）在C線處具有針對金標(biāo)抗原的抗體（抗金標(biāo)抗原抗體），不管樣本里面有沒有IgM*，過量的金標(biāo)抗原會到達(dá)C線處，與抗金標(biāo)抗原抗體結(jié)合，形成“抗金標(biāo)抗原抗體-金標(biāo)抗原”復(fù)合物顯紅色。
3、競爭法（小分子物質(zhì)檢測）膠體金試紙?jiān)?/strong>
小分子抗原或半抗原（比如小分子激素或藥物）缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上位點(diǎn)，因此不能采用雙抗體夾心法，可以采用競爭法模式。樣本中的一定量的小分子抗原和固相抗原競爭結(jié)合金標(biāo)抗體，樣本中抗原量越多，結(jié)合在固相上的標(biāo)記抗體就會越少，最后顯色的也會越淺。為方便大家理解，我們以脂多糖(（LPS）)為例。
（1）若樣品中有LPS，則LPS和金標(biāo)抗體結(jié)合，形成“LPS-金標(biāo)抗體”復(fù)合物。T線處為LPS-BSA偶聯(lián)物（LPS通過與BSA等大分子物質(zhì)偶聯(lián)從而能夠固定于NC膜），金標(biāo)抗體由于被樣品中的LPS優(yōu)先結(jié)合，從而在T線處與不能與BSA偶聯(lián)并固定的LPS結(jié)合，故T線處結(jié)合反應(yīng)被抑制，無顯色反應(yīng)；而“LPS-金標(biāo)抗體”復(fù)合物繼續(xù)向后泳動，在C線處（含抗金標(biāo)抗體）結(jié)合形成“LPS-金標(biāo)抗體-抗金標(biāo)抗體”復(fù)合物顯紅色（T線無色，C線紅色）。
（2）若樣品中沒有LPS，則金標(biāo)抗體隨無LPS樣品液體流動至T線處時(shí)，與通過BSA固定在NC膜上的LPS結(jié)合，形成“金標(biāo)抗體-LPS-BSA”，從而出現(xiàn)紅色顯色反應(yīng)；而過剩的“金標(biāo)抗體”繼續(xù)向后泳動，在C線處（含抗金標(biāo)抗體）結(jié)合形成“金標(biāo)抗體-抗金標(biāo)抗體”復(fù)合物顯紅色（T線紅色，C線紅色）。
4、膠體金法優(yōu)缺點(diǎn)
膠體金的最大優(yōu)點(diǎn)就是快速，方便。但是缺點(diǎn)也很明顯—通量不高而且試紙的準(zhǔn)確性高度依賴于抗體的特異性（抗體特異性不好容易有交叉反應(yīng)）。