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阻斷劑你了解多少 淺談阻斷劑

發(fā)布時(shí)間:2022-05-18 09:58:40來(lái)源:

目前為止在試劑研發(fā)方面本人應(yīng)用阻斷劑的經(jīng)驗(yàn)還是非常少的,因?yàn)榧夹g(shù)支持反饋的情況很少,所以一直沒(méi)在意。但其實(shí)作為研發(fā)人員,我們自己心里清楚,如果不添加阻斷劑,對(duì)于一些“特殊人群”,出假陰或者假陽(yáng)的概率是很大的,比如我自己,曾經(jīng)接受過(guò)Avastin的鼠抗治療,所以不排除治療期間出現(xiàn)其他指標(biāo)的HAMA假陽(yáng)。
這幾年“異嗜性抗體”是非?;鸬囊粋€(gè)詞,我看很多公司研發(fā)內(nèi)部的企業(yè)培訓(xùn)都會(huì)涉及它。我翻了翻國(guó)外的幾家資料(Meridian、Roche、Scantibodies...),雖然是廣告宣傳頁(yè),但是都很細(xì)致地講述了異嗜性抗體的產(chǎn)生原理和消除辦法,大家有時(shí)間可以去詳細(xì)讀一下,我這里談一些自己的體會(huì)。
們一般用小鼠IgG單抗的偏多,所以異嗜性抗體的著重點(diǎn)一般都放在HAMA(Human anti mouse antibodys)。人身體里之所以出現(xiàn)HAMA,資料里介紹一般是天生或者是后天免疫獲得的,對(duì)于天生來(lái)源的,大部分是多價(jià)的,而對(duì)于后天獲得的一般是單/雙價(jià)的(By Roche)。
(一)我們下面來(lái)分析產(chǎn)生假陰或假陽(yáng)的幾種情況(By Meridian):
(1雙抗夾心法/間接法:

我們從上圖中可以看出,對(duì)于HAMA樣本,有可能會(huì)引發(fā)陰性樣本的假陽(yáng)問(wèn)題,也有可能會(huì)引發(fā)弱陽(yáng)性樣本的假陰問(wèn)題。

(2)競(jìng)爭(zhēng)法

對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)法,HAMA的存在會(huì)影響小分子與對(duì)應(yīng)抗體的結(jié)合,從而會(huì)引發(fā)假陽(yáng)的風(fēng)險(xiǎn);

(3)捕獲法:

捕獲法一般檢測(cè)的是抗體,不管是檢測(cè)哪種類(lèi)型的抗體,HAMA的存在會(huì)影響二抗與被檢測(cè)抗體的結(jié)合,從而會(huì)引發(fā)假陰性。

另外這里有一點(diǎn)需要注意的是,由于抗體檢測(cè)是分型檢測(cè)的,即使沒(méi)有HAMA的存在,如果采取的是包被抗原檢測(cè)某一指定類(lèi)型的抗體,那么其他類(lèi)型的抗體都會(huì)與被檢類(lèi)型的抗體產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng),所以這時(shí)候除去其它類(lèi)型的抗體就成為了檢測(cè)的關(guān)鍵。比如上圖中的例子,我們檢測(cè)的抗體類(lèi)型是IgM,那么IgG就會(huì)與其競(jìng)爭(zhēng)包被抗原,此時(shí)用羊抗人IgG就成為了試劑提升靈敏度的關(guān)鍵。

(二)阻斷劑的種類(lèi)

阻斷劑按照其供應(yīng)商的分類(lèi)一般就是分為主動(dòng)類(lèi)被動(dòng)類(lèi)。被動(dòng)類(lèi)阻斷劑好理解,就是非特異性的鼠、兔、羊、牛等來(lái)源的Ig或抗血清。正是因?yàn)镠AMA與試劑中所用的抗體產(chǎn)生反應(yīng),所以在反應(yīng)體系中事先加入過(guò)量的動(dòng)物Ig來(lái)中和HAMA,這樣就會(huì)消除影響。但是據(jù)說(shuō)被動(dòng)阻斷劑的用量很大,但效果有時(shí)候卻并不明顯,也就是性?xún)r(jià)比太低,所以人們又造出來(lái)了主動(dòng)阻斷劑。主動(dòng)阻斷劑我通過(guò)資料并沒(méi)看出是什么,但是我理解的就是被動(dòng)阻斷劑帶了導(dǎo)航,主動(dòng)去封閉掉樣本中不想要的抗體。對(duì)于抗原檢測(cè),本身檢測(cè)的就不是抗體,所以你可以用抗人IgG、IgM等把它們都封閉掉,斷了這個(gè)風(fēng)險(xiǎn),但是需要注意的是這個(gè)抗人Ig抗體絕對(duì)不能和鼠Ig有交叉。對(duì)于抗體檢測(cè),上面提到了,檢測(cè)IgM就封閉掉IgG,這時(shí)候有個(gè)點(diǎn),有時(shí)候憑借天然的IgG阻斷劑根本無(wú)法屏蔽掉HAMA,很大的原因在于主動(dòng)阻斷劑的個(gè)頭不夠大,或者是結(jié)合位置不好。

見(jiàn)上圖,如果主動(dòng)阻斷劑為IgG單體,而且針對(duì)的是人Ig-Fc的羧基末端,那么對(duì)Fab端的阻斷作用就微乎其微,這時(shí)候可以把IgG單體合成聚合物形式,這樣一來(lái)位阻就大了,作用會(huì)明顯增加;或者說(shuō)阻斷劑的作用位點(diǎn)直接就是人Ig-Fab端的骨架區(qū),這樣即使是單體作用也很明顯;或者做成抗人Ig-Fab的聚合物,作用會(huì)更好??赡苓@就是羅氏阻斷劑的研發(fā)思路。

(三)阻斷劑的應(yīng)用問(wèn)題

這里呢,我不太注重化學(xué)發(fā)光平臺(tái)的應(yīng)用,因?yàn)榘l(fā)光平臺(tái)涉及清洗步驟,只要把阻斷劑加在樣稀里就可解決一些問(wèn)題,主要還是層析平臺(tái)。層析平臺(tái)一般是將阻斷劑加在樣稀或樣品墊,但是這里有一個(gè)問(wèn)題,阻斷劑如果也是小鼠來(lái)源的,質(zhì)控線(xiàn)又包被的羊抗鼠,這樣標(biāo)記物的鼠抗就會(huì)與阻斷劑的鼠抗發(fā)生強(qiáng)烈的競(jìng)爭(zhēng),對(duì)于定性試劑還好,對(duì)于以T/C形式定量的試劑,這肯定是個(gè)災(zāi)難,所以獨(dú)此時(shí)立C線(xiàn)系統(tǒng)的使用就顯得很必要。目前雞IgY和DNP應(yīng)該是首選的系統(tǒng)。

另外阻斷劑目前種類(lèi)比較多,不同的項(xiàng)目可能適用性也不同,這就需要大量的篩選工作??傊稽c(diǎn),量大不一定管用,合適最重要。

 

標(biāo)簽: 阻斷劑

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