緩沖液是一種能夠抵抗溶液中因添加少量酸或堿而引起的pH變化的液體。通常由弱酸及其鹽或弱堿及其鹽配制而成。許多生物化學(xué)反應(yīng)需要在穩(wěn)定的pH環(huán)境下進(jìn)行，比如血液就是一個(gè)重要的緩沖體系。
      除了pH對(duì)生化反應(yīng)效率的影響外，緩沖液中的某些離子也可能引發(fā)一些不必要的反應(yīng)，從而干擾目標(biāo)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。因此，在生命科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)中，研究人員需要謹(jǐn)慎選擇適合的緩沖體系。

                                                                                                                             1、Good's緩沖液&蛋白純化常用

　　Good's緩沖液，又稱為兩性離子緩沖液，是一種不會(huì)干擾生物化學(xué)反應(yīng)過(guò)程，并且不會(huì)對(duì)酶反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用的緩沖液，因此非常適合用于研究和實(shí)驗(yàn)易變性或者 pH 敏感型蛋白。
       目前常用的 Good's 緩沖液有 20 多種，下面將簡(jiǎn)要介紹在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常見(jiàn)的三種。

1.MES緩沖液

　　MES可固體按照摩爾濃度計(jì)算用量,配成液體后,通過(guò)氫氧化鈉來(lái)調(diào)整PH。以0.2mol/LMES緩沖液為例:MES(C6H13NO4S*,0.2mol/L):39.05g/L;*注意是否是水合物,水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。
      常用有效緩沖范圍為pH5.5-7.7。

2.Tris緩沖液

①Tris-HCl緩沖液

　　Tris固體按照摩爾濃度計(jì)算用量,配成液體后,通過(guò)HCl來(lái)調(diào)整pH。以0.2mol/LTris-HCI緩沖液為例:Tris(C4H11NO3*,0.2mol/L):24.2g/L;*注意是否是水合物,水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量

②Tris-EDTA緩沖液

　　常用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，主要用于 DNA 的溶解和保存等。以 1×TE 緩沖液 (pH 8.0) 為例：

　　●1M Tris-HCl (pH 8.0)：稱取 Tris 12.12 克，加入純化水 80 毫升溶解，滴加濃鹽酸調(diào)整 pH 至 8.0，然后定容至 100 毫升。

　　●1M EDTA (pH 8.0)：稱取 EDTA-Na?·H?O 18.6 克，加入純化水 40 毫升，劇烈攪拌，滴加氫氧化鈉溶液調(diào)整 pH 至 8.0，固體物質(zhì)充分溶解后，定容至 50 毫升 (EDTA-Na 只有在 pH 為 8.0 時(shí)才會(huì)完全溶解)。

　　●1×TE (10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.0)：取 10 毫升 1M Tris-HCl，1 毫升 1M EDTA 溶液，混勻后定容至 1 升。

③TAE緩沖液

　　將上述Tris-EDTA緩沖液調(diào)整pH的鹽酸換成冰乙酸,即是TAE緩沖液。

　　注意:1.Tris溶液會(huì)吸收空氣中的二氧化碳,所以應(yīng)保存在使用塞子的瓶中。2.Tris緩沖液在不同溫度下,呈現(xiàn)的pH是不同的,配置時(shí)應(yīng)考慮使用環(huán)境,最好在使用環(huán)境溫度條件下進(jìn)行配制。

3.HEPES緩沖液

　　緩沖范圍在中性附近。由于可以在敞開(kāi)式容器中保持穩(wěn)定的pH,所以常用于細(xì)胞培養(yǎng),或者診斷試劑的保存溶液。以1M,pH7.0的HEPES溶液為例:HEPES稱取119.15g,
      溶解在400mL純化水中,用NaOH溶液調(diào)整pH至7.0,后定容至500mL。

                                                                                                                                                         2、磷酸緩沖液(PBS)

　　PBS的緩沖pH值范圍非常廣,可配置各種pH值的酸、堿、中性緩沖液,是最常見(jiàn)的緩沖體系之一。配制酸性磷酸緩沖液可直接用NaH2PO4,或KHPO,pH范圍在1-5;堿性緩沖液可直接用NaH2PO4,或K2HPO4,,
      pH范圍在9-12;中性緩沖液則用等濃度的NaH2PO4,和Na2HPO4,溶液混合,pH在5.5-8.5。PBS的緩沖能力強(qiáng),應(yīng)用范圍廣,但也有缺點(diǎn):

　?、僖着c常見(jiàn)的鈣離子Ca2+、鎂離子Mg²+等重金屬離子結(jié)合形成沉淀。

　　②會(huì)抑制某些反應(yīng),比如抑制某些酶的催化作用。

      配制100mLPBS緩沖液所用量如下圖所示:

     以0.2mol/L中性磷酸緩沖液為例,不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可(緩沖液的摩爾濃度指的是磷酸根的濃度,所以若稀釋后pH值有微小變化需要調(diào)整,不要用帶有磷酸根的溶液):

磷酸氫二鈉(Na2HPO4*,0.2mol/L):28.39g/L;磷酸二氫鈉(NaH2PO4*,0.2mol/L):24g/L*注意是否是水合物,水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。不同pH的PBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

3、碳酸緩沖液（CBS）

CBS一般由碳酸和碳酸氫鈉配制,多為堿性.

以0.2mol/L碳酸緩沖液為例,不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可(pH調(diào)整,同上):碳酸鈉(Na2CO3*,0.2mol/L):21.2g/L;碳酸氫鈉(NaHCO3*,0.2mol/L):16.8g/L*注意是否為水合物,水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。

不同pH的CBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制50mL CBS緩沖液所用量如下圖所示:

4、檸檬酸緩沖液（CPBS)

　　CPBS一般由碳酸和碳酸氫鈉配制,常用于分子實(shí)驗(yàn)的雜交處理液和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù)、暴露等。檸檬酸容易與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生沉淀,反應(yīng)中應(yīng)避免鈣離子混入。

　　以0.2mol/L檸檬酸緩沖液為例,不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可(pH調(diào)整同上):

　　檸檬酸(C6H8O7,*,0.2mol/L):38.4g/L;

　　檸檬酸鈉(C6H5Na3O7,*,0.2mol/L):51.6g/L

　　*注意是否是水合物,水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。

　　不同pH的CPBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制20mLCPBS緩沖液所用量如下圖所示:

5、硼酸緩沖液（PBS）

　　BBS一般由硼砂和硼酸配制,是堿性范圍內(nèi)常用緩沖液。BBS的缺點(diǎn)是能和很多代謝產(chǎn)物生成絡(luò)合物,比如和糖反應(yīng)形成穩(wěn)定的復(fù)合物而導(dǎo)致緩沖能力下降。以0.2mol/L硼酸緩沖液為例,不同摩爾濃度緩沖液加純化水
      稀釋即可(如需后續(xù)調(diào)整pH,同磷酸緩沖液一樣,不要用含有硼酸根的溶液): 硼砂(Na2B4O7,·10H2O*,0.2mol/L):76.27g/L;硼酸(H2B03*,0.2mol/L):12.37g/L

　　*注意是否是水合物,水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。不同pH的BBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制10mLBBS緩沖液所用量如下圖所示:

需要注意的是:硼砂易失去結(jié)晶水,必須保存在帶塞子的瓶中。