隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，為克服鼠源性單抗的異源性反應(yīng)，人工改造鼠源性單克隆抗體成為現(xiàn)實。1984年出現(xiàn)了嵌合重組抗體技術(shù)，1994年美國批準(zhǔn)第一個嵌合抗體藥物上市，至今嵌合抗體藥物總數(shù)已有多個，包括Abciximab，Basiliximab，Pdtmximab，Cetuximab等。

　　基本概念

　　人-鼠嵌合抗體：利用DNA重組技術(shù)將鼠源單抗的輕鏈、重鏈可變區(qū)插入含有人抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化哺乳動物細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)所產(chǎn)生的單克隆抗體(圖1)。人-鼠嵌合抗體的人源化程度可達(dá)到70%，完整的保留了鼠源單抗的可變區(qū)，最大限度的保留了親本活性，人抗體恒定區(qū)的引入則大大降低了免疫原性。

　　圖1：利妥昔單抗：人CD20特異的嵌合單克隆抗體。 IgG抗體分子由2個重鏈和2個通過二硫鍵連接的輕鏈組成。

　　基本原理

　　人鼠嵌合抗體基本原理是從分泌某種鼠單抗的雜交瘤細(xì)胞基因組中分離并鑒定出重排的功能性鼠VL(輕鏈可變區(qū))和VH(重鏈可變區(qū))，經(jīng)過基因重組分別與人的CL(輕鏈恒定區(qū))和CH(重鏈恒定區(qū))區(qū)基因按照一定的方式相拼接，克隆到表達(dá)載體中構(gòu)建鼠/人輕重鏈基因表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞表達(dá)來制備特異性嵌合抗體(圖2)。

圖2， 人鼠嵌合抗體制備過程

　　對于其他類型的人源化抗體，其優(yōu)勢在于，技術(shù)路線簡單，易于操作;抗體完整性好，在體內(nèi)滯留時間長;鼠源抗體的親和力和特異性都得到保留，在臨床上得到了良好的反應(yīng)。

　　構(gòu)建人鼠嵌合抗體主要包括：克隆鼠抗體可變區(qū)基因，釣取人抗體恒定區(qū)基因，拼接鼠抗體可變區(qū)基因與人抗體恒定區(qū)基因以及構(gòu)建載體和宿主細(xì)胞。詳細(xì)內(nèi)容見文章《嵌合抗體的構(gòu)建》

　　嵌合抗體的分類

　　嵌合抗體主要有三種類型：

　　1、嵌合IgG抗體

　　目前嵌合抗體的研究主要集中在嵌合IgG(Immunoglobulin G)抗體。其構(gòu)建基本原理是從生產(chǎn)某種鼠源單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞中得到目的抗體V區(qū)(variable region)基因，再與人類的C區(qū)(constant region)基因重組并克隆到合適載體中，然后轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞表達(dá)(如圖1)。

　　在構(gòu)建嵌合抗體時應(yīng)根據(jù)不同目的選擇不同的C片段。這是因為不同類型的人抗體C區(qū)與補(bǔ)體和Fc(fragment crystallizable,Fc)相互作用的能力以及引發(fā)細(xì)胞溶解的功能不盡相同。在體內(nèi)免疫系統(tǒng)中，抗體的Fc段和效應(yīng)細(xì)胞相互作用，發(fā)揮特異的生物學(xué)功能。例如IgE(Immunoglobulin E)可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等，IgM活化補(bǔ)體的能力最強(qiáng)，IgG1的補(bǔ)體活化能力比IgG3強(qiáng)得多，且在ADCC作用(antibody dependent cell mediated cytotoxicity)觸發(fā)能力上也比IgG3強(qiáng)得多。在與Fc受體的結(jié)合能力上IgG1和IgG3最強(qiáng)，IgG4次之，而IgG2幾乎檢測不到。

　　2、嵌合Fab和F(ab’)2抗體

　　嵌合Fab(antigen-binding fragment, Fab)和F(ab’)2(具有兩個抗原結(jié)合表位的片段)抗體的最大優(yōu)勢就是滲透力強(qiáng)。Fab嵌合抗體制備原理為：將功能性抗體L,H鏈的V區(qū)基因與人的輕鏈k和H鏈CH1進(jìn)行重組，克隆到表達(dá)載體中，在轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞表達(dá)。不過對于大多數(shù)該類型的抗體來說，由于親和力較低，分子量小，很容易被腎小球過濾而從血液中消失，因此大多數(shù)不適合單獨使用于臨床治療。

　　為了改善效果，人們把Fab抗體改造成嵌合F(ab’)2抗體，提高了其分子量，其藥代動力學(xué)也有所改善，取得了一定的治療效果。

　　圖3，嵌合Fab和F(ab’)2抗體

　　結(jié)語

　　鼠單抗因為在體內(nèi)可以引起HAMA(Human anti-mouse antibodies)反應(yīng)，臨床上的應(yīng)用受到了極大的限制。隨著基因重組技術(shù)的發(fā)展，人們可以對鼠源單克隆抗體進(jìn)行改造，研究者們便發(fā)現(xiàn)了人鼠嵌合抗體—這一最早誕生的基因工程抗體。其有顯著的優(yōu)勢：保留親本的高特異性和高親和力，在體內(nèi)有較長半衰期，易于操作等。但是嵌合抗體雖然可以部分解決異種蛋白的排斥問題，但由于其還含有鼠源V區(qū)，依然有可能會誘發(fā)HAMA反應(yīng)，干擾抗體療效，誘發(fā)超敏反應(yīng)，在臨床上其應(yīng)用會受到一定限制。所以隨著基因工程技術(shù)，細(xì)胞工程技術(shù)等生物技術(shù)的飛速發(fā)展，研究者們又相繼改造出了人源化抗體和全人源抗體。相信在相關(guān)技術(shù)的驅(qū)動下，單抗會更快更好的適用于臨床，從而造福于人類。